在幾十年的行醫和閱讀經典醫學書籍的過程中，李時珍發現了古代草藥書中的許多錯誤，並決定重新編寫壹本草藥書。明世宗嘉靖三十壹年(1552)，李時珍著手編纂《本草綱目》，以《證本草》為藍本，參考了800多部書籍。這期間，從嘉靖四十四年(1565)起，他離家多次考察，足跡遍及湖廣、江西、直隸等地的諸多名山大川。
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《本草綱目》的影響
《本草綱目》出版後，促進了本草學的進壹步發展。倪的《本草綱目》、的《本草綱目》、黃公修的《本草求真》都是受其理論啟發的本草經典。克裏斯·羅伯特·達爾文在他的著作中也多次引用了這本書的資料，並稱之為“中國古代百科全書”。
英國的李約瑟稱贊李時珍是“藥學領域的王子”。這本書是本草學的傑作。出版後，很快流傳到朝鮮、日本等國，後被翻譯成日文、韓文、拉丁文、英文、法文、德文和俄文。