關於十大功勞生物堿含量測定的報道很少。報道了用薄層掃描法測定黃柏中ⅳ、ⅵ和ⅶ [12]的含量。薄層光密度法測定四種十大功勞莖中ⅳ、ⅵ、ⅶ和木蘭堿[13]:HPLC法測定十大功勞葉中ⅶ [14]的含量。在變波長高效液相色譜法測定小檗屬植物根中生物堿的基礎上[15]，為開發利用十大功勞屬植物資源，建立了高效液相色譜法測定十大功勞屬植物中ⅰ ~ ⅶ的方法。這七種成分在203 nm的固定波長下可檢測1次，在203 ~ 346 nm的可變波長下可檢測兩次。而後者不僅能使七種組分在各自的最大吸收波長處被檢測到，而且避免了吸收波長不同的相鄰色譜峰的幹擾，從而提高了分析的靈敏度和準確度。本文采用可變波長高效液相色譜法對我國十大功勞屬三種植物的根、皮、木、皮、木以及不同產地的10種植物的根進行了定量分析。由於參考物質的量少，僅對I、III和V進行了定性分析。
1儀器和試劑測試
沃特世高效液相色譜儀(510泵、490E檢測器、U6K采樣器、基線810色譜工作站)。
對照品:鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿購自中國藥品生物制品檢定所；中國藥品生物制品檢定所的塗研究員介紹了非洲的四己胺；小檗胺購自中國科學院林業與土壤研究所，經重結晶純化。漢防己甲素和漢防己甲素由中國醫學科學院藥用植物研究所提供(對照品用矽膠薄層色譜和兩種溶劑體系分離成單壹斑點；經HPLC測定，主要成分的峰高和峰面積均在97%以上。植物標本由中國科學院植物研究所研究員應盛駿鑒定。乙腈為色譜純，甲醇和磷酸二氫鉀為分析純，使用去離子水。
2實驗方法和結果
2.1色譜條件[15]
色譜柱:μ-Bondapak苯基(10μm，3.9mm×300mm，美國沃特世公司)；流動相:0.02mol·L-1磷酸二氫鉀-乙腈(7∶3)；柱溫:室溫；流量:1.0ml min-1；靈敏度:0.08AUFS；檢測波長:固定波長203nm，0.0-10.0min可變波長203nm，10.0min後346 nm。7種生物堿對照品的色譜圖見圖1。
圖1 7種生物堿的色譜圖(在203 nm處檢測)
Ⅰ.海膽酮ⅱ。黃連素ⅲ。十四胺ⅳ。藥根堿
ⅴ.粉防己堿ⅵ。巴馬汀ⅶ。黃連素
2.2回歸方程和線性範圍
根據參考文獻[15]，以樣品體積(μg)為橫坐標(x)，以峰面積(微伏-秒)為縱坐標(y)，得到回歸方程。見表1。
2.3樣品溶液的制備
準確稱取0.65438±0g樣品幹粉於50mL磨口三角瓶中，加入20mL甲醇，稱重，浸泡65438±02h，超聲提取60min，稱重，補足損失的甲醇，搖勻，密封靜置；取上清液5.0mL於離心管中，密封後離心(10000 r min-1，10min)；取上清液(2.0mL)作為樣品溶液。
表1四種生物堿定量分析的回歸方程和線性範圍
原料
回歸方程式
r
線性範圍/μg
Ⅱ
y = 9.017x×104+4.318×105
0.9993(n=7)
0.019~0.296
Ⅳ
y = 4.239 x×104-8.228×104
0.9999(n=9)
0.019~0.996
Ⅵ
y = 4.191x×104+1.446×105
0.9998(n=9)
0.020~1.008
Ⅶ
y = 4.209 x×104+1.278×105
0.9998(n=9)
0.020~1.010
2.4精度測試[15]
準確吸取10μL註射用樣品溶液，重復10次測定。得到樣品中各組分濃度(μg·mL-1)的RSD(%):小檗胺0.28，藥根堿0.84，巴馬汀0.75，小檗堿1.21。
2.5樣品回收試驗
準確稱取0.05g5份狹葉十大功勞幹幹粉於50mL磨口三角瓶中，按文件[15]操作，每份重復測定3次；ⅱ、ⅳ、ⅵ和ⅶ的計算回收率分別為97.2% ~ 102.1%、98.9% ~ 100.3%、97.2% ~ 100.1%和99.9%。
2.6樣品分析[15]
準確吸取65438±00μL註射用樣品溶液，在203 ~ 346 nm可變波長下檢測，對ⅱ、ⅳ、ⅵ、ⅶ進行定量分析，對ⅰ、ⅲ進行定性分析。然後準確註入10μL，固定波長203nm檢測，得到各樣品的特征光譜，對組分ⅴ進行定性分析。三種十大功勞和10種不同產地植物的根、皮、皮、莖、木中七種生物堿的分析結果見表2和表3。
3討論
3.1本文建立的方法可在同壹色譜條件下使用25分鐘。
表2 3種十大功勞屬植物不同部位7種生物堿的分析結果(%)，n=2
植物名稱
位置
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
Ⅶ
寬苞十大功勞亞種。甘坪文種
(四川中醫學校)
根
-
+
0.68
+
0.05
0.78
根皮
+
0.01
-
1.66
+
0.14
3.76
根木
+
+
0.69
+
0.06
0.84
莖皮
-
-
0.34
+
0.05
0.47
樹幹木材
+
-
0.53
+
0.08
0.21
金柑。)Fedde:窄葉的十大貢獻
(重慶南川藥物種植研究所)
根
+
0.34
+
1.17
+
0.06
1.27
根皮
+
0.98
+
3.02
+
0.20
3.54
根木
+
0.18
+
0.54
+
0.70
莖皮
+
0.29
+
1.47
+
0.19
0.41
樹幹木材
+
0.28
+
0.98
+
0.05
1.36
長苞鐵線蕨，Longbract的十大貢獻
(四川峨邊)
根
+
+
0.40
+
0.62
1.73
根皮
+
+
1.10
+
1.30
6.94
根木
-
+
0.33
+
0.80
0.98
莖皮
-
+
0.74
-
0.60
1.24
樹幹木材
-
-
+
0.21
-
0.28
0.45
+:成分檢出-:成分未檢出+:含量< 0.01%。
表3 10十大功勞屬植物根中7種生物堿的分析結果(%)，n=2
植物名稱
生產地點
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
Ⅶ
十大功勞。)卡爾。
四川峨邊
+
+
0.44
+
0.78
1.44
重慶奉節
+
0.02
+
0.50
+
0.64
2.07
鼠刺得10分，M.bodinieri Gagnep。
重慶金佛山
+
0.10
+
0.81
+
0.09
0.77
重慶藥材種植所
+
0.08
+
0.79
+
0.06
1.11
重慶中醫藥研究院
+
+
0.41
+
0.05
0.78
湖南新華*
+
+
0.16
+
0.53
1.44
四川和湖北的十大貢獻。廣藿香
四川峨眉山
-
+
0.45
+
0.14
1.10
四川峨邊
-
+
0.82
+
0.12
1.22
重慶縉雲山
+
+
0.35
+
0.02
0.73
甘平的十大貢獻。甘坪文種
重慶南川
+
0.01
+
1.01
+
0.04
1.58
四川省中醫學校
-
+
0.68
+
0.05
0.78
金柑。)Fedde:窄葉的十大貢獻
重慶藥材種植所
+
0.34
+
1.17
+
0.06
1.27
四川峨眉山
+
+
0.82
+
0.06
1.42
湖南新華*
+
0.19
+
0.88
+
0.07
0.59
M.gracilipes(Oliv)Fedde，纖細莖的十大貢獻。
四川峨眉山
-
+
0.67
+
0.15
0.99
長苞鐵線蕨，Longbract的十大貢獻
四川峨邊
+
+
0.40
+
0.62
1.73
巖石紫黃色斜帶絳蟲
四川峨眉山
-
0.02
+
1.05
+
0.17
0.55
M.polyodota Fedde，多齒十大貢獻者
四川峨眉山
-
0.02
+
0.67
+
0.10
0.52
重慶金佛山
-
0.01
+
0.22
+
0.13
0.30
M.sp(未知物種)
重慶金佛山
-
0.01
+
0.28
+
1.38
1.30
+:成分檢出-:成分未檢出+:含量< 0.01% *:測定部位為莖。
測定了十大功勞不同部位和不同產地植物中的ⅰ、ⅱ、ⅴ二芐基異喹啉和ⅲ、ⅳ、ⅵ、ⅶ原小檗堿型生物堿。該方法重現性好，精密度高，適用範圍廣。
3.2十大功勞屬和小檗屬在親緣關系和化學成分上相似。結果表明，在相同或相似的HPLC色譜條件下，可以測定這兩個屬中相同的生物堿成分。
3.3在10株植物中，III的峰值很低。根據ⅳ、ⅵ、ⅶ的分子結構和峰面積推斷，ⅲ的含量小於0.01%。除狹葉十大功勞外，ⅰ和ⅱ在其他植物中含量較低，峰較弱。ⅴ的峰在大多數植物中很強，含量較高(本實驗中因對照品量少，未進行定量)。
3.4這七種成分在屬內不同部位的分布和含量是不同的，不同的植物種類其差異程度也不同。含量基本上是根皮最高，莖皮次之，根木和莖木次之。過去莖入藥[1]，但從分析結果來看，其根也是不可忽視的資源。
作者:呂成都華西醫科大學光華藥學院610044。
王力是小北京協和醫科大學中國醫學科學院藥用植物研究所所長。
參考
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